什麼是 A260/A280 比值？
A260/A280 比值是利用分光光度法快速判斷核酸純度的指標。核酸在 260 nm 的紫外光下有強烈吸收，而蛋白質（因為含有色胺酸、酪胺酸等芳香族胺基酸）則在 280 nm 處吸收。將 260 nm 的吸光值除以 280 nm 的吸光值，所得比值可反映 DNA 或 RNA 製備物中含有多少蛋白質或其他污染物。
如何使用本計算機
先以紫外光分光光度計（例如 NanoDrop）測量樣品，記下 260 nm 與 280 nm 的吸光值。將兩個數值輸入上方欄位，計算機便會立即算出比值。為求讀數準確，請務必先以空白對照歸零，並適當稀釋樣品。
公式說明
計算方式非常簡單：
結果判讀
一般而言，DNA 的比值約為 1.8 即可視為「純淨」，RNA 則約為 2.0。若比值明顯偏低（例如低於 1.7），可能代表樣品中含有蛋白質、酚（phenol）或其他在 280 nm 附近吸光的污染物。比值高於預期則可能是 DNA 樣品受到 RNA 污染所致。
實例演算
假設 NanoDrop 顯示 A260 = 1.8、A280 = 1.0，則比值為
A260/A280 純度參考值
A260/A280 比率比較了 260 nm（核酸的吸收最大值）處的吸光度與 280 nm（蛋白質中芳香族胺基酸的吸收最大值）處的吸光度。由於純化的 DNA 和 RNA 具有特徵性的比率，該值是快速分光光度檢查樣品清潔度的方法。互補的 A260/A230 比率可檢測不同類別的污染物（有機化合物和沙粒鹽），因此通常一起報告這兩項。
| 樣品 / 條件 | 預期 A260/A280 | 預期 A260/A230 | 解釋 |
|---|---|---|---|
| 純雙鏈 DNA (dsDNA) | ~1.8 | ~2.0–2.2 | 清潔基因組/質粒 DNA 的公認目標 |
| 純 RNA | ~2.0 | ~2.0–2.2 | 清潔全細胞/信使 RNA 的公認目標 |
| 純單鏈 DNA (ssDNA) / 寡核苷酸 | ~1.9 | ~2.0–2.2 | 根據鹼基組成介於 dsDNA 和 RNA 之間 |
| A260/A280 低於 ~1.7 | < 1.7 | — | 可能存在蛋白質、酚或其他 280 nm 吸收體 |
| A260/A280 高於 ~2.0（針對 DNA） | > 2.0 | — | 可能有 RNA 混入、核苷酸降解或鹼性 pH |
| 低 A260/A230（例如 < 1.8） | — | < 1.8 | 鹽酸鹽、酚、EDTA 或碳水化合物污染 |
常見污染物及其影響
- 蛋白質 — 在 280 nm 處強烈吸收（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸），將 A260/A280 比率降低至 1.8 以下。
- 酚 — 酚氯仿萃取的殘留物；它在 270–280 nm 附近以及 230 nm 處吸收，壓低兩個比率並使表觀產率虛高。
- 鹽酸鹼 / 沙粒鹽和 EDTA — 在 230 nm 附近吸收，主要降低 A260/A230 比率，而 A260/A280 保持接近正常。
- DNA 製劑中的 RNA — 將 A260/A280 比率向上推動（趨向 2.0），因為在此比率下 RNA 的讀數高於 DNA。
實例計算：分光光度計報告 A260 = 0.452 和 A280 = 0.251。純度比率為 1.80，表示清潔的雙鏈 DNA。請注意，只有在 pH ~7.5–8.5 下使用適當的緩衝液空白讀數時，比率才有意義，因為酸性條件可能會人為地將該值降低約 ~0.2–0.3。
使用注意事項與精準校對原則（6 大核心守則）
📐 1. 嚴格對齊輸入量綱與單位
輸入各項數值時請務必確認量綱（例如小時、天數、金額、百分比），避免單位不匹配引發推算偏差。
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